Warum wird Western Blot verwendet, um Elisa zu bestätigen? + Beispiel

Warum wird Western Blot verwendet, um Elisa zu bestätigen? + Beispiel
Anonim

Antworten:

In der Regel handelt es sich hierbei um einen Antikörperspezifitätstest.

Erläuterung:

In einem ELISA ist es sehr schwer zu sagen, ob Ihr Antikörper an Ihr interessierendes Protein, ein völlig anderes Protein oder eine Reihe von Proteinen bindet.

Der Western Blot wird verwendet, um die Spezifität des Antikörpers zu überprüfen (Sie sollten beachten, dass der Western Blot möglicherweise nicht alle Kreuzreaktionen mit falschen Proteinen nachweist).

Im Western Blot können Sie die Größe des Proteins erkennen, an das der Antikörper bindet (dies ist bei einem ELISA nicht möglich). Wenn Ihr Antikörper zum Beispiel an ein Protein von 56 kDa bindet und Sie eine Bande bei ~ 56 kDa im Blot sehen, können Sie sich also sicher sein, dass der Antikörper an das richtige Protein bindet.

Wenn Sie dagegen eine Bande bei 32 kDa gesehen haben, können Sie schlussfolgern, dass der Antikörper an das falsche Protein bindet. Wenn auf dem Western Blot viele Banden auftauchten, würde dies (ohne Proteinabbau) darauf schließen lassen, dass der Antikörper an eine Reihe verschiedener Proteine bindet.

In dem Beispiel der 32-kDa-Bande, die auf dem Gel auftritt, und auch der Mehrfachbande, würde dies vermuten lassen, dass dem Antikörper die Spezifität für den ELISA fehlt und dass die im ELISA beobachteten Ergebnisse möglicherweise nicht spezifisch für das interessierende Protein sind.

Wenn ich diese Art von Test durchführte, könnte ich eine Art "interferierendes" Reagenz enthalten, um den Antikörper zu testen. Wenn ich zum Beispiel meinen Antikörper gegen ein Peptid erhöht hatte, kann ich das Peptid in die primäre Antikörperlösung aufnehmen, um die korrekte Bindung zu testen. Das heißt, in Gegenwart des Peptids sollte ich keine Bande oder kein Ergebnis des ELISA sehen, da mein primärer Antikörper aufgrund des Vorhandenseins eines Peptidüberschusses nicht binden könnte.