Antworten:
GAPDH wird häufig als Ladesteuerung verwendet.
Erläuterung:
Beim Western Blotting verwenden wir häufig GAPDH als Ladekontrolle. Dies bedeutet, dass wir bei der Suche nach GAPDH überprüfen können, ob auf verschiedenen Spuren des Blots äquivalente Mengen an Proteinen vorhanden sind.
Ein Anwendungsbeispiel - sagen wir, wir haben eine Krankheit, von der wir glauben, dass sie ein bestimmtes Protein in der Zelle erhöht. Wir würden eine Probe aus "gesunden" Zellen und eine weitere Probe aus "erkrankten" Zellen zusammenstellen. Wir würden dann für den Western Blot äquivalente Proteinmengen beider Proben auf ein Gel laden.
Nachdem wir den Blot auf unser interessierendes Protein untersucht haben, stellen wir fest, dass in den erkrankten Zellen der Proteingehalt tatsächlich erhöht ist (dh, es wird eine dunklere Bande auf dem Blot gebildet). Um zu beweisen, dass diese Erhöhung des Proteins auf eine Veränderung der Expression in der Zelle zurückzuführen ist, ist dies nicht auf ein Ladenartefakt zurückzuführen (d. H., Die stärkere Bande wird durch eine Änderung der Proteinexpression in den Zellen verursacht und nicht, dass wir versehentlich mehr laden von der "Krankheitsprobe" als der "gesunden" Probe) würden wir auch den Blot für GAPDH untersuchen, um zu zeigen, dass die Gesamtproteinspiegel in beiden Bahnen gleich sind.
Dadurch zeigen wir, dass äquivalentes Protein in die beiden Bahnen geladen wurde und dass die Änderung der Bandenintensität, die wir beobachten, auf Änderungen der Proteinexpression für das interessierende Protein zurückzuführen ist.
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In der Regel handelt es sich hierbei um einen Antikörperspezifitätstest. In einem ELISA ist es sehr schwer zu sagen, ob Ihr Antikörper an Ihr interessierendes Protein, ein völlig anderes Protein oder eine Reihe von Proteinen bindet. Der Western Blot wird verwendet, um die Spezifität des Antikörpers zu überprüfen (Sie sollten beachten, dass der Western Blot möglicherweise nicht alle Kreuzreaktionen mit falschen Proteinen nachweist). Im Western Blot können Sie die Größe des Proteins erkennen, an das der Antikörper bindet (dies ist bei einem ELISA nicht mög