Was ist Chromatographie-Ionenaustausch? + Beispiel

Was ist Chromatographie-Ionenaustausch? + Beispiel
Anonim

Antworten:

Es ist ein Verfahren zum Trennen verschiedener Proteine basierend auf ihren Ladungs- und Bindungseigenschaften an ein Material.

Erläuterung:

Bei verschiedenen pH-Werten tragen unterschiedliche Proteine unterschiedliche Ladungen. Wenn Sie eine Mischung von Proteinen bei einem festgelegten pH-Wert einstellen, können Sie eine Mischung haben, die Proteine mit unterschiedlichen Ladungseigenschaften enthält.

Wenn diese Mischung von Proteinen auf eine Säule gegossen wird, die ein Material mit einer Ladung darauf enthält, bindet die Säule Proteine in entgegengesetzter Ladung.

Sie können dann verschiedene Lösungen mit unterschiedlichen Ionenmengen verwenden, um die Proteine aus der Säule zu eluieren (zu entfernen).

Angenommen, Sie hatten eine Mischung von Proteinen, von denen Sie ein bestimmtes Protein reinigen möchten. Wenn Sie wussten, dass Ihr Protein bei einem bestimmten pH-Wert positiv geladen war, könnten Sie die Mischung auf eine Säule mit negativ geladenem Material geben.

Alle Proteine, die keine Ladung trugen, würden bei einer negativen Ladung direkt durch die Säule fließen. Sie könnten dann Ihr positiv geladenes Protein freisetzen, indem Sie die Säule mit positiven Ionen durchfluten, wodurch die negative Ladung der Säule vervollständigt wird. Dieser Wettbewerb würde dann dazu führen, dass Ihr Protein von Interesse eluiert wird.

Hier ist ein Beispiel dafür.

Jedes Tablett enthält einen Puffer mit unterschiedlicher Konzentration. Wie aus der 175 mM Probe (obere linke Ecke) ersichtlich, hat sich nur sehr wenig rot / braunes Protein an die geladene Membran gebunden, da zwischen den Ionen im Puffer und dem Puffer eine Konkurrenz besteht Protein für die geladenen Bindungsstellen auf der Membran (Die Ionen im Puffer haben "gewonnen", weil es mehr davon gibt und sie die Bindung des Proteins verhindert haben). In der Probe rechts unten hat sich viel Protein an die Membran gebunden, da weniger Ionen vorhanden sind, um um Bindungsstellen zu konkurrieren.

In diesem Video können Sie die Anionenaustauschchromatographie in Betrieb sehen: