Wie isolieren Wissenschaftler DNA, um sie zu untersuchen?

Antworten:

Es gibt ein paar Schritte, um dies zu tun. Bitte ignorieren Sie mein schlechtes Englisch. Ich hoffe, Sie können den Vorgang trotzdem verstehen.

Erläuterung:

Das ist nicht so schwierig, wie Sie vielleicht denken.

Nehmen wir an, wir möchten DNA aus einem Kalbthymus isolieren. Sie müssen diese Anweisungen befolgen (soweit ich weiß, sind sie für einen Apfel gleich, aber es gibt winzige Variationen):

1. Nehmen Sie 3 Stücke von 3 Gramm und schneiden Sie es in winzige Stücke, so klein wie möglich.

2. Legen Sie es in einen Mixer, mit 75 ml Kochsalz-Natriumcitrat (SSC) pro Stück, und vergewissern Sie sich, dass die Klinge des Mixers vollständig mit SSC bedeckt ist. Fügen Sie bei Bedarf ein Stück Thymus hinzu.

   SSC stellt sicher, dass die Zellmembranen aufgelöst werden.

   Mischen Sie weiter, bis alles glatt ist.

3. Legen Sie es in ein Röhrchen für die Zentrifuge und tarieren Sie es mit einem anderen Röhrchen, damit die Zentrifuge nicht bricht

4. Das Röhrchen 20 Minuten bei 5000 U / min in die Zentrifuge geben

5. Wenn Sie die Röhrchen aus der Zentrifuge nehmen, sollten Sie zwei Komponenten sehen. Der Boden hat eine feste Substanz, dies wird Pellet genannt und hält die Zellkerne mit der DNA fest. Sie sehen auch eine flüssige Substanz, die als Überstand bezeichnet wird und aus dem SSC mit den gelösten Zellmembranen besteht.

6. Gießen Sie den Überstand in einer fließenden Bewegung weg. Dies wird als Dekantieren bezeichnet, und Sie können das Pellet zurücklassen.

7. Geben Sie eine kleine Menge 2,2 M NaCl in das Röhrchen mit dem Pellet, so dass das Pellet gerade mit NaCl bedeckt ist. NaCl bewirkt, dass die Proteine, die die DNA umgeben, ausfallen.

8. Rühren Sie es mit einem leeren Reagenzglas oder Rührstab. Schließlich sollten Sie zwei Komponenten erhalten. Die Proteine unten und eine viskose Flüssigkeit darüber.

9. Nehmen Sie die viskose Flüssigkeit mit einer Pipette heraus und stellen Sie sicher, dass Sie keine Proteine mit der viskosen Flüssigkeit einnehmen. (sehr kleine Proteinstücke sind sehr schwer zu vermeiden, versuchen Sie jedoch, so viele Proteine wie möglich zu vermeiden)

10. Geben Sie die von Ihnen pipettierte viskose Flüssigkeit in ein Becherglas und fügen Sie 2x so viel Ethanol hinzu. Fügen Sie das Ethanol vorsichtig hinzu, weil Sie es nicht mit der DNA mischen möchten. An der Schnittstelle zwischen dem Ethanol und der viskosen Flüssigkeit sollten DNA-Blasen auftauchen sehen.

11. Vorsichtig mit einem Glasstab umrühren, die DNA ist negativ geladen, so dass sie am Stab haften bleibt.

12. Legen Sie es in ein Reagenzglas und lösen Sie es mit SSC auf.

Eine spezielle Maschine kann Ihnen dann sagen, wie viel DNA Sie isoliert haben und wie rein sie ist.