Warum verwenden wir eine Negativkontrolle in der PCR?

Warum verwenden wir eine Negativkontrolle in der PCR?
Anonim

Antworten:

Siehe unten

Erläuterung:

Die PCR arbeitet mit einer Template-DNA. Nehmen wir an, Sie testen auf HIV (HIV ist ein RNA-Virus, aber wenn es in eine Zelle eindringt, wird es in DNA umgewandelt … also gibt es HIV-DNA in einer infizierten Zelle). Die verwendeten Primer erzeugen ein Produkt (Amplikon), das einem Teil der HIV-DNA entspricht. Wenn Sie dieses Amplikon sehen, dann haben Sie die HIV-Sequenz …, aber wenn Sie keine negative Kontrolle haben, können Sie eine Kontamination haben.

PCR ist äußerst empfindlich. Es gibt viele Lösungen für die PCR (Wasser, Puffer, dNTPs, Enzym) … und alle können leicht mit DNA aus anderen Proben oder sogar aus dem Amplifikat kontaminiert werden, das in der gestrigen Reaktion hergestellt wurde. Wenn Sie also eine DNA-Probe von Patient X haben und durch PCR auf HIV überprüfen, können die PCR-Primer aus der HIV-DNA in der DNA-Probe von Patient X (falls diese Person HIV hat) ein Produkt herstellen, oder sie können es ausscheiden Kontamination. Sie können jedoch nicht feststellen, ob es sich um eine Kontamination oder um HIV in der Patienten-DNA handelt.

Sie führen also eine Wasserkontrolle durch. In Tube 1 platzieren Sie alle Komponenten der Reaktion, und für die DNA fügen Sie nur Wasser hinzu. Dies ist die Negativkontrolle. NICHTS sollte sich hier verstärken. In Tube 2 stecken Sie alle Reaktionskomponenten und die DNA von Patient X. Wenn Sie hier ein Produkt erhalten (und nichts in Tube 1), hat Patient X wahrscheinlich die HIV-DNA in seiner / ihrer DNA. Wenn Sie ein Produkt in Tube 1 und Tube 2 erhalten, haben Sie ein Kontaminationsproblem und Sie können nicht feststellen, ob das HIV in der Patientenprobe von der Krankheit oder von einer Kontamination herrührt.

So führen Sie immer eine Wasserkontrolle durch (Wasser anstelle von DNA).