Warum werden DNase und Lysozym in Lyse-Schritten bei der Proteinreinigung eingesetzt?

Warum werden DNase und Lysozym in Lyse-Schritten bei der Proteinreinigung eingesetzt?
Anonim

Antworten:

Um die Proteinfraktion zu reinigen …

Erläuterung:

Wenn Sie ein (oft spezifisches) Protein reinigen, müssen Sie so viel Müll wie möglich entfernen, der an sie gebunden sein könnte.

Das hängt davon ab, nach welchem Protein Sie suchen, aber im Allgemeinen ist es eine gute Idee, vor allem in präparativ Reinigung, um möglichst viele Verunreinigungen zu entfernen.

1:

Da Proteine im Allgemeinen groß sind und in den unteren Banden Ihrer (ultrazentrifugierten) Fraktion auftreten werden, möchten Sie alle Nukleinsäuren entfernen, insbesondere wenn das von Ihnen verarbeitete Protein ein Problem darstellt Pol1, Umgekehrte Transkriptase oder ein beliebiges anderes Enzym, das an Replikation / Transkription / Translation beteiligt ist.

Sie können die in der Probe enthaltenen Nukleinsäuren durch Verwendung einer DNAse trennen. Dadurch wird DNA vollständig in ihre Bestandteile hydrolysiert.

Wohlgemerkt, es gibt verschiedene DNAse's, die sich alle in ihrem Mechanismus und ihrer Spezifität für ihr Substrat unterscheiden. Abhängig von der verwendeten DNAse kann dies entweder angezeigt werden Endo- oder Exo- Nuklease-Aktivität …

Mehr zum Punkt, RNAse ist besser geeignet, da RNA normalerweise mehr im Auftriebs- / Fraktionsbereich von Proteinen liegt und an das Protein gebunden werden kann.

2:

Lysozym: Ein Enzym, das mindestens zwei Funktionen hat:

Es deglykosyliert Enzyme: Die meisten Proteine, die im Blutstrom transportiert werden, sind glykosyliert: Sie haben einige Zuckermoleküle, die an sie gebunden sind. Lysozym entfernt die Zuckerreste.

Es hat auch die Fähigkeit, die Zellwand von Gram-positiven Bakterien aufzubrechen, was dazu führt, dass diese zellulär werden Lyse. (wenn Sie Protein von grampositiven Bakterien reinigen möchten)

Alle abgebauten Produkte, entweder Nukleinsäure oder Zuckertrümmer, treten aufgrund ihres "leichteren" Auftriebs in den oberen Fraktionen des Zentrifugenröhrchens auf.