Was ist Western Blotting?

Was ist Western Blotting?
Anonim

Antworten:

Es ist die Verwendung von Antikörpern zum Nachweis von Proteinen, die durch SDS-PAGE abgetrennt und dann auf eine Membran übertragen wurden.

Erläuterung:

Zellen enthalten eine Mischung von Proteinen (viele Tausende), die durch SDS-PAGE getrennt werden können.

Die Proteine aus der SDS-PAGE werden dann unter Verwendung eines elektrischen Feldes vom Gel zu einer Membran übertragen, die typischerweise aus Nitrocellulose oder Polyvinylidenfluorid (PVDF) besteht.

Die Membran wird mit einem für das interessierende Protein spezifischen Primärantikörper sondiert. Ein sekundärer Antikörper wird dann zum Nachweis des primären Antikörpers verwendet. Der sekundäre Antikörper enthält einen Marker, der durch eine chemische Reaktion nachgewiesen werden kann, um entweder eine sichtbare Bande auf der Membran zu ergeben oder ein Signal, das von einer speziellen Kamera erfasst werden kann.

Bei Bedarf kann ich diese Antwort ausführlich erläutern, da ich während meiner Karriere mehrere hundert Western-Blots durchgeführt habe.