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Viele…
Erläuterung:
Es gibt viele Gründe, warum Bands nicht auf einem Western-Blot erscheinen. Haben die Proben- und Antikörperkombinationen in der Vergangenheit funktioniert?
Nachfolgend einige Beispiele, die mir im Moment einfallen, die dazu führen können, dass Bands nicht erscheinen:
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Hat das Protein vom Gel übertragen? Versuchen Sie, die Membran mit etwas wie Ponceau S oder Amido Black zu färben, um zu sehen, ob die Bänder vorhanden sind. Manchmal können Sie die Proteinbanden auf der Membran sehen, indem Sie sie benetzen und in einem Winkel zum Licht halten.
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Funktioniert der Primärantikörper? Dies ist ein schwieriger Test, und der einzige Weg, den Sie können, besteht darin, eine positive Kontrolle hinzuzufügen, bei der Sie wissen, dass Sie das Protein von Interesse haben. Wenn Sie etwas von dem Protein haben, das von Interesse ist, können Sie es auf die Western Blotting-Membran auftragen (d. H. Sie lassen das Gel nicht laufen) und prüfen, ob Sie ein Ergebnis erhalten, wenn Sie die Membran wie einen Western Blot verarbeiten.
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Erkennt der sekundäre Antikörper den primären Antikörper? Wieder ein schwieriger Test. Der einzige Test, den Sie durchführen können, ist der Punkt 2, der oben erwähnt wurde.
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Funktioniert das "Erkennungssystem"? Abhängig von der verwendeten Nachweismethode können Sie versuchen, einen Teil des sekundären Antikörpers einzupicken, um zu sehen, ob die Nachweislösung und auch der Auslöser / das Enzym auf dem sekundären Antikörper funktioniert. Können Sie also die Reaktion nur mit dem sekundären Antikörper auslösen?
Schließlich könnte es so einfach sein wie eine der Lösungen, die verwendet werden, wenn das Plot falsch zusammengesetzt wird. Wenn zum Beispiel die Salzkonzentration im Puffer falsch ist, kann dies dazu führen, dass die Antikörper aus dem Blot freigesetzt werden. Das gleiche würde auch passieren, wenn der pH-Wert der Puffer falsch war.
Die "seltsamste" Ursache für einen nicht funktionierenden Western-Blot, den ich persönlich erlebt habe, war der Wechsel des Lieferanten des Milchpulvers, mit dem wir die Membran blockiert haben. Das Pulver des neuen Lieferanten enthielt eine Phosphotyrosinphosphatase, die alle Phosphatgruppen entfernte, die wir mit unserem Anti-Phosphotyrosin-Antikörper nachweisen wollten.
John beschloss, sein Hinterhof-Deck zu erweitern. Die Abmessungen des rechteckigen Decks betragen 25 Fuß mal 30 Fuß. Sein neues Deck wird 50 Fuß mal 600 Fuß groß sein. Wie viel größer wird das neue Deck sein?
29.250 Quadratmeter größer oder 40-mal größer. Aktuelle Größe: 25'xx30 '= 750 sq.ft. Neue Größe: 50'xx600 '= 30.000 sq. Ft. Größenunterschied: 30.000 sq.ft. - 750 sq.ft = 29.250 sq.ft. Als Verhältnis: (30.000 Quadratfuß) / (750 Quadratfuß) = 40
Lauren ist 1 Jahr mehr als doppelt so alt wie Josua. In drei Jahren wird Jared 27 Jahre alt sein und nicht so viel wie Lauren sein Vor 4 Jahren war Jared 1 Jahr weniger als das Dreifache des Alters von Josua. Wie alt wird Jared in 3 Jahren sein?
Das gegenwärtige Alter von Lauren, Joshua und Jared ist 27,13 und 30 Jahre. Nach 3 Jahren wird Jared 33 Jahre alt. Das gegenwärtige Alter von Lauren, Joshua und Jared sei x, y, z Jahre. Durch gegebene Bedingung ist x = 2 y + 1; (1) Nach 3 Jahren ist z + 3 = 2 (x + 3) -27 oder z + 3 = 2 (2 y + 1 + 3) -27 oder z = 4 y + 8-27-3 oder z = 4 y -22; (2) vor 4 Jahren z - 4 = 3 (y-4) -1 oder z-4 = 3 y -12 -1 oder z = 3 y -13 + 4 oder z = 3 y -9; (3) From Gleichungen (2) und (3) erhalten 4 y-22 = 3 y -9 oder y = 13:. x = 2 * 13 + 1 = 27 z = 4 y -22 = 4 * 13-22 = 30 Das gegenwärtige Alter von Lauren, Joshua und Jared b
Befürworter von gentechnisch veränderten Lebensmitteln behaupten oft, dass GVO die einzige Möglichkeit seien, eine hungrige Welt zu ernähren. Wie könnte das wahr sein? Wie könnte es falsch sein?
Die GMOs haben viele Vor- und Nachteile. Ich habe dieses fantastische Video zu GMOs gefunden. Es beschreibt, was es eigentlich ist, was es bringt und was es bringt [http://www.youtube.com/watch?v=7TmcXYp8xu4]